黃曲霉毒素的檢測(cè)方法
1.生物鑒定法 其特點(diǎn)是待檢樣品不需很純，主要用于定性，共有10種:（1）抑菌試驗(yàn);（2）對(duì)微生物遺傳因子影響試驗(yàn);（3）細(xì)菌發(fā)光試驗(yàn);（4）熒光反應(yīng);（5）組織培養(yǎng)檢測(cè)法;（6）雞胚試驗(yàn);（7）鴨胚試驗(yàn);（8）鱒魚試驗(yàn);（9）植物試驗(yàn);（10）飼喂實(shí)驗(yàn)動(dòng)物試驗(yàn)。生物鑒定法是利用AFT能影響微生物、水生動(dòng)物、家禽等生物體的細(xì)胞代謝，來鑒定AFT的存在。其方法專一性差，靈敏度低，一般只作為化學(xué)分析法的佐證。
2.化學(xué)分析法 zui常用的為薄層層析法（TLC），適用于糧食及其制品、調(diào)味品等AFB 1 的檢測(cè)，主要是半定量。利用AFB 1 具有熒光性的特點(diǎn)，提取和濃縮樣品中的AFB 1 ，用單向或雙向展開法在薄層上分離后，在365nm紫外光照射下產(chǎn)生藍(lán)紫色熒光，根據(jù)在薄層上顯示熒光的zui低檢出量定量，其靈敏度為5μg/kg。由于薄層層析法測(cè)定AFB 1 不是很專一，因此樣品中其他熒光物質(zhì)的干擾造成測(cè)定誤差。可以用以下方法進(jìn)行確定:一是用多種溶劑系統(tǒng)展開，可將AFB 1 、G 1 及各種AFT類似物分開;二是采用層析斑點(diǎn)的化學(xué)試驗(yàn)，將樣品提取物用甲酸亞硫酰氨或三氟醋酸處理，用衍生化的方法將AFB 1 與其類似物分開;三是層析斑點(diǎn)的物理試驗(yàn)，可根據(jù)紫外吸收光譜，紅外吸收光譜和熒光屏光譜的差別，將非黃曲霉毒素和AFT分開。
3.儀器分析法 液相色譜法（HPLC）是20世紀(jì)70年代初發(fā)展起來的一種以液體為流行相的新型色譜技術(shù)。是分離分析各種AFT的好方法，如配以熒光檢測(cè)器，則該法具有靈敏度高、分離能力強(qiáng)、特異性好、測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確可靠等優(yōu)點(diǎn)。在國(guó)外己廣泛地用于食品中AFT的測(cè)定。但由于食物樣品成分復(fù)雜，在進(jìn)行液相色譜分離分析前，需對(duì)樣品作*的凈化處理。常用的凈化方法是柱色譜法，該法操作繁瑣，且需使用大量有機(jī)溶劑。免疫親和柱作為AFT特異有效的分離凈化和濃縮手段，一出現(xiàn)就和液相色譜法結(jié)合用來測(cè)定糧食、飲料、尿、血及奶中的AFT。王光建等 將免疫親和柱的高度特異性和液相色譜法的高分離能力相結(jié)合，所建立的花生和玉米中AFB l 、B 2 、G 1 、G 2 的測(cè)定方法，具有雜質(zhì)干擾少、操作簡(jiǎn)便、使用有機(jī)溶劑少、靈敏準(zhǔn)確等優(yōu)點(diǎn)，整個(gè)分析操作可在15min內(nèi)完成。
4.免疫分析法 這種方法是利用免疫、酶及生化技術(shù)，開辟了AFT分析的新領(lǐng)域。目前應(yīng)用的方法有放射免疫法、親和層析法和酶聯(lián)免疫法。（1）放射免疫法。特異性強(qiáng)、靈敏度高、比較準(zhǔn)確迅速、操作簡(jiǎn)單、易于標(biāo)準(zhǔn)化。但也有嚴(yán)重的缺點(diǎn)，特別是需要持殊的設(shè)備和安全保護(hù)，妨礙了更廣泛的應(yīng)用。（2）親和層析法。利用免疫化學(xué)反應(yīng)原理，采用大劑量的單克隆抗體，選擇性吸附提取液中的抗原物質(zhì)-AFT。由于抗原-抗體反應(yīng)具有高靈敏、高選擇、高特異性等特點(diǎn)，從而大大提高了試樣的凈化效果及檢測(cè)靈敏度，同時(shí)可顯著減少有毒有害試劑的使用，十分有利于操作人員的健康和環(huán)境保護(hù)。張藝兵等提出了一種以免疫親和柱凈化結(jié)合熒光光度法檢測(cè)AFT的新方法，檢測(cè)低限可達(dá)10 -11 ～10 -12 g/ml。20世紀(jì)90年代起，免疫親和技術(shù)在食品分析領(lǐng)域得到了廣泛應(yīng)用。（3）酶聯(lián)免疫法（ELISA）。基本原理是將抗體吸附于固相載體上，加入已經(jīng)用酶標(biāo)記的抗原與樣品中的待測(cè)物混合物進(jìn)行特異性的免疫反應(yīng)，然后再加入酶的底物進(jìn)行顯色反應(yīng)，通過顏色的深淡來判斷樣品中待測(cè)物的（抗原）含量。酶聯(lián)免疫法大體分為兩類:—是用雙抗體夾心法檢測(cè)樣本中的AFT。如Wogan將AFB l 牛血清白蛋白涂于微滴定板池，經(jīng)初步培養(yǎng)后，加兔的APTB 1 抗體和游離APTB 1 用磷酸4—硝基苯酯作基質(zhì)。以堿性磷酸酶—抗兔免疫球蛋白檢測(cè)第—抗體的結(jié)合;二是用競(jìng)爭(zhēng)法檢測(cè)樣本中的AFT。如在涂抗體的小孔中，用乙烷萃取的AFB l ，并與結(jié)合了辣根過氧化酶的AFTB 1 混合室溫下10min后，用水洗除去未結(jié)合的黃曲霉共軛物，加底物后在405nm檢測(cè)。ELISA法靈敏度高，比薄層法提高了近200～500倍 ［1，5］ ，特異性強(qiáng)，熒光物質(zhì)、色素、結(jié)構(gòu)類似物對(duì)結(jié)果無干擾。而且回收率高，準(zhǔn)確性好，提取方法簡(jiǎn)單，測(cè)定時(shí)間僅需2h，可同時(shí)檢測(cè)幾十份樣品，提高了工效。
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