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蛋白質(zhì)新技術(shù)
更新時(shí)間:2011-03-07   點(diǎn)擊次數(shù):2844次

蛋白質(zhì)新技術(shù)

        蛋白質(zhì)這一新技術(shù)為科研人員深入了解活細(xì)胞中蛋白質(zhì)組半衰期動(dòng)力學(xué)開辟了新途徑。

  清除不必要或有害的蛋白質(zhì)是細(xì)胞進(jìn)行自身調(diào)控的重要途徑之一。在生物體中主要通過兩種機(jī)制來實(shí)現(xiàn):一種是通過蛋白酶體降解蛋白質(zhì),而另一種則是以細(xì)胞生長的方式對(duì)細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)進(jìn)行稀釋??焖俜至训募?xì)胞例如細(xì)菌主要是依賴“稀釋”的方式,而終末分化的哺乳動(dòng)物細(xì)胞則主要是通過蛋白質(zhì)降解的途徑。“由于蛋白質(zhì)的清除途徑通常取決于細(xì)胞的類型,科學(xué)家們常常忽略了降解和稀釋之間存在的平衡關(guān)系

  脈沖追蹤術(shù)和蛋白質(zhì)合成抑制法來檢測(cè)蛋白質(zhì)的降解速率。盡管脈沖追蹤術(shù)已被應(yīng)用了數(shù)十年,然而由于這種方法需要使用放射性標(biāo)記和蛋白特異性抗體,使其應(yīng)用范圍受到很大的限制;而蛋白質(zhì)合成抑制劑則有可能會(huì)擾亂細(xì)胞的功能

 在這篇文章中研究人員開發(fā)了一種檢測(cè)蛋白質(zhì)半衰期的新技術(shù),將其命名為“漂白追蹤”(bleach-chase)術(shù)。他們首先利用熒光YFP標(biāo)簽標(biāo)記目的蛋白,進(jìn)而利用短暫的閃光脈沖使10-60%的熒光基因失去熒光(即所謂“漂白”),由于時(shí)間短暫因此不會(huì)對(duì)細(xì)胞造成影響。

 “漂白促使標(biāo)記蛋白分為了兩種亞群:熒光蛋白和非熒光蛋白。而理論上漂白后細(xì)胞不會(huì)再合成新的非熒光蛋白,熒光的衰減則只可能是依賴于蛋白質(zhì)清除,”Eden解釋說:“我們利用熒光時(shí)差顯微術(shù)對(duì)漂白細(xì)胞和非漂白細(xì)胞進(jìn)行了觀測(cè),通過比較兩種細(xì)胞中的熒光水平改變從而獲得了非熒光蛋白的動(dòng)力學(xué)數(shù)據(jù)。”

 ‘漂白追蹤’術(shù)除了能準(zhǔn)確定量蛋白質(zhì)的半衰期,還能幫助科學(xué)家鑒別哪些蛋白發(fā)生了活性降解,哪些蛋白則隨細(xì)胞分裂而發(fā)生了稀釋,”Eden說:“我們?cè)谠囼?yàn)中針對(duì)人類癌細(xì)胞中100種不同的蛋白質(zhì)進(jìn)行了降解和稀釋分析,發(fā)現(xiàn)在檢測(cè)時(shí)間段中48%的蛋白質(zhì)出現(xiàn)了降解,10%的蛋白質(zhì)發(fā)生了稀釋,而42%的蛋白則同時(shí)存在降解和稀釋。”

  在進(jìn)一步的研究中,Eden等利用一種化療藥物對(duì)細(xì)胞施加壓力以減慢細(xì)胞的生長速率,觀測(cè)這一效應(yīng)對(duì)于蛋白質(zhì)清除的影響。研究人員觀察到盡管短半衰期蛋白質(zhì)沒法發(fā)生變化,但長半衰期蛋白質(zhì)則經(jīng)過更長時(shí)間的稀釋在更大程度上被清除。當(dāng)他們檢測(cè)以不同速率減慢細(xì)胞生長的其他壓力時(shí),觀察到了相同的效應(yīng)。“我們認(rèn)為這是一種相當(dāng)普遍的現(xiàn)象,”Eden說:“這一簡(jiǎn)單原理幫助我們更深入地了解了對(duì)應(yīng)不同壓力時(shí)蛋白質(zhì)清除率變化。值得注意的是,研究結(jié)果表明細(xì)胞并沒有利用蛋白質(zhì)降解來補(bǔ)償稀釋率的變化。
 “相比于常規(guī)的脈沖追蹤術(shù)完成這些試驗(yàn)非常的簡(jiǎn)單,并且可以更快速地生成結(jié)果。它使得科學(xué)家們能夠真正實(shí)現(xiàn)大規(guī)模蛋白質(zhì)半衰期檢測(cè),”Eden指出:“然而其存在的*缺點(diǎn)就是蛋白質(zhì)必須首先進(jìn)行熒光標(biāo)記,這有可能會(huì)對(duì)細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)清除產(chǎn)生影響,但我們已非常小心的利用脈沖追蹤對(duì)比試驗(yàn)排除了這種可能性。”

相信隨著熒光標(biāo)記蛋白庫日益廣泛地應(yīng)用于越來越多的生物體,這項(xiàng)新技術(shù)也將顯示出更加廣泛的用途。

 

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